專(zhuān)家分析人凝血因子Ⅲelisa試劑盒樣本處理及要求

　　1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。
　　2、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。
　　3、尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
　　4、細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。
　　5、組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
　　6、標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
　　7、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
　　人凝血因子Ⅲelisa試劑盒操作步驟：
　　1、標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
　　2、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒加樣：分別設空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
　　4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
　　7、溫育：操作同3。
　　8、洗滌：操作同5。
　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應。
　　11、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。