活體細胞RANK免疫組化染色試劑盒須注意事項

　　一、為達到活體細胞RANK免疫組化染色試劑盒化學(xué)技術(shù)的要求，組織固定越新鮮越好。
　　在免疫組化zui后結果的判斷時(shí)，?？梢?jiàn)到均勻一片的似非特異性染色的現象，經(jīng)多方研究認為，活體細胞RANK免疫組化染色試劑盒是一種假性非特異性的染色。因為腫瘤組織中含有的抗原較易發(fā)生擴散彌散，腫瘤細胞無(wú)限制的生長(cháng)和生長(cháng)過(guò)速，導致腫瘤中間部分組織血液供給困難，造成缺血壞死，壞死細胞中的抗原由于機體的作用，可以被均勻地散布于細胞與細胞間的間質(zhì)，這是抗原發(fā)生彌散的一種方式。另一種抗原彌散的方式就是，由于組織沒(méi)有及時(shí)的固定所引起的。離體的組織不及時(shí)固定，組織就會(huì )自溶，抗原就會(huì )擴散，這是一非常普通的常識，但要做好卻是極不容易。標本從外科切除到浸入固定液需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，在這段時(shí)間里，有的抗原就可以發(fā)生擴散。
　　二、組織脫水必須*干凈
　　組織塊取材不能太大過(guò)厚，才能較好地完成脫水的過(guò)程。如果取材太厚，在較短的時(shí)間內脫水不*，將可引起一系列的問(wèn)題，比如浸蠟不*，切片不好完成，切不完整。由于先天不足，導致后來(lái)切片染色的脫落，造成染色的失敗，或者由此反復操作，造成年人力物力的浪費，造成病理報告的延期發(fā)出等。因此，對取材的要求是除了要求要有藝術(shù)性外，即平整、外觀(guān)好看，還要求適中。
　　三、切片必須完整、均勻、平展、無(wú)鄒折
　　活體細胞RANK免疫組化染色試劑盒應用于免疫組織化學(xué)染色的切片，對切片的質(zhì)量要求較高，切片必須完整，平展、無(wú)汽泡，無(wú)鄒折，這樣有利在染色時(shí)的沖洗，有利于切片的牢固附貼。如果切片不平展，免疫組化染色后，可出現染色不均勻的現象，顏色深淺不一，不平。如果切片有汽泡切片在烘烤時(shí)，由于汽泡的破裂影響了汽泡周?chē)慕M織，在其周?chē)捎^(guān)察到深淺不一的染色。如果切片有鄒折，免疫組化染色后，在鄒折的地方有深淺不一的顏色，這是一種假陽(yáng)性，容易引走混淆。
　　四、切片的附貼必須牢固，必須使用合適的粘貼劑。
　　免疫組織化學(xué)染色前的前期準備工作，就是必須對新的載玻片進(jìn)行處理，新的載玻片表面看起來(lái)很干凈，有人認為不需要進(jìn)行任何的處理，都能夠適合使用，這是一種錯誤的想法。新出廠(chǎng)的載玻片，表面復蓋著(zhù)開(kāi)一層油脂樣的物質(zhì)，如果不加以處理，對切片的附貼是極為不利的。我們的做法是：新的載玻片，放于玻璃清洗液中浸泡4小時(shí)甚至過(guò)夜，然后取出，經(jīng)自來(lái)水*沖洗后，浸入酒精中達2小時(shí)以上，取出擦干備用或烘干也可。
　　五、切片必須烘烤附貼牢固，既要經(jīng)得起抗原修復時(shí)高溫的作用而不使輕易脫片，又不至于破壞抗原。
　　活體細胞RANK免疫組化染色試劑盒應用于免疫組化染色的切片。由于整個(gè)過(guò)程需經(jīng)幾個(gè)階段的處理，如抗原修復時(shí)抗原修復液的沸騰且需持續十幾分鐘，PBS的反復沖洗，有的甚至于4℃冰箱中孵育達十幾小時(shí)。因此，對切片的質(zhì)量要求很高，尤其是切片的附貼程度。
　　六、切片脫蠟必須干凈，否則將會(huì )影響免疫組化染色的zui后結果。
　　蠟不溶于水，不與其它的臨床使用的抗體相融合。它只能靠特用的試劑，處理足夠的時(shí)間，才能將其除去。如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上，將會(huì )引起許多弊病，如染色不均勻，陽(yáng)性物時(shí)隱時(shí)現，真假難辨，背景染色增加等。為了解決上述的問(wèn)題，切片在染色前必須*脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強，脫蠟時(shí)間較短。較受使用者的青睞。
　　七、必須*抑制內源性過(guò)氧化物酶的活性，才能降低背景的染色。
　　在各種組織中都含有很多的內源性過(guò)氧化物酶，尤其在紅細胞，中性粒細胞，單核細胞嗜酸性細胞，出血的組織壞死的組織等等。含有這種酶的各細胞和組織如果在染色前不對其進(jìn)行處理和抑制，它們將會(huì )在DAB底物的顯色時(shí)，與HRP一樣催化底樣，使之顯色，使之生成與陽(yáng)性物一樣的黃棕色，造成混亂。為止，在活體細胞RANK免疫組化染色試劑盒染色前，都必須對內源性過(guò)氧化物酶進(jìn)行抑制。當然，對它們進(jìn)行*的消除是不行的，因為抑制太厲害，對抗原也會(huì )有相同的抑制作用。
　　八、須適當合理地使用封閉試劑
　　為了減少背景產(chǎn)生的非特異性染色，在免疫組化染色的過(guò)程中，在加入一抗孵育前，常常加入非免疫動(dòng)物血清，以減少背景的染色，陳尚季等認為：抗體是高度的電荷分子，可能與帶有相應電荷的組織成分無(wú)特異性地結合。由于這種非特異性結合，將導致標記的部分局部化和膠原的假陽(yáng)性染色。要用一種不相干的抗體居先處理，可能減少和標記的抗體無(wú)特異性結合。
　　九、選擇合適的抗體
　　至今為止，應用于臨床的常用抗體有幾十種，在這當中又可分為兩種類(lèi)型。