石蠟切片免疫組化實(shí)驗-卵白素-生物素-過(guò)氧化物

石蠟切片免疫組化實(shí)驗-卵白素-生物素-過(guò)氧化物

實(shí)驗材料　蠟塊切片
 

試劑、試劑盒
 

多聚甲醛　蒸餾水　蔗糖　過(guò)氧化氫　甲醇　PBS　酒精　KPBS　牛血清白蛋白　疊氮納　一抗　二抗
 

儀器、耗材
 

冰箱　顯微鏡　燒杯
 

實(shí)驗步驟
 

1.  4%多聚甲醛常規灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中*。蠟塊制作。切片，貼片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后；
 

2.  加入配好的0.3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液（甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%過(guò)氧化氫）30 min，以消除內源性過(guò)氧化物酶的影響，0.01 M  PBS清洗5 min×3；
 

3.  加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01 M  KPBS 100 ml）30 min，以增加細胞的通透性，0.01 M KPBS清洗5 min×3；
 

4.  加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00 g+0.01 M PBS 100 ml+疊氮納0.08 g）稀釋的一抗，4℃存放24-48 h；吸去抗體，0.01 M KPBS洗5 min×3；
 

5.  加入0.01 M KPBS稀釋的的二抗，室溫孵育2 h。0.01 M KPBS洗5 min×3；
 

6.  加入ABC復合物之類(lèi)的抗體，室溫孵育2 h，0.01 M KPBS洗5 min×3；蒸餾水迅速沖三次；
 

7.  加入顯色液，進(jìn)行免疫組織化學(xué)顯色，時(shí)間一般不超過(guò)30 min，可不時(shí)在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，待細胞著(zhù)色而背底顏色較淡時(shí)馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01 M KPBS終止反應；
 

8.  梯度酒精脫水之后，封片，拍照。