細菌趨化作用（chemotaxis）軟瓊脂檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

 細菌趨化作用（chemotaxis）軟瓊脂檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

  細菌趨化作用（chemotaxis）軟瓊脂檢測試劑是一種旨在采用半固體瓊脂糖，構建化學(xué)趨化物（chemoattractant）彌散形成濃度差異的空間，觀(guān)察細菌群移現象、環(huán)形（ring）標志，以及空白區域等外觀(guān)形態(tài)，進(jìn)行分析細菌趨化作用的威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其特別適用于各種細菌以及突變型、轉基因處理細菌的趨化性研究和篩選，同時(shí)檢測趨化因子和抑制因子的作用。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，性能穩定，操作簡(jiǎn)便，重復一致。

技術(shù)背景

趨化性（chemotaxis）是指細胞或生物體對于介質(zhì)中的特定化學(xué)分子的濃度差異形成的刺激所引起的趨向運動(dòng)。許多種類(lèi)的游動(dòng)細胞具有趨化性，例如細菌和阿米巴細胞朝著(zhù)食物源移動(dòng)；人體免疫細胞包括巨噬細胞和中性白細胞朝著(zhù)外來(lái)入侵細胞移動(dòng)。此外，許多在發(fā)育進(jìn)程中發(fā)生的形態(tài)變化與細胞向化學(xué)物質(zhì)濃度差異趨化移動(dòng)相關(guān)。細菌趨化性是細胞感受化學(xué)信號，由膜結合受體連接到細胞內傳遞機制，通過(guò)鞭毛運動(dòng)產(chǎn)生相應的移動(dòng)反應。細菌趨化性檢測包括時(shí)相（temporal）和空間（spatial）梯度檢測。其中軟瓊脂群移平板檢測（soft-agar swarming plate assay）是空間梯度分析的常用方法。作為半固體介質(zhì)之一的瓊脂糖（Agarose），構建化學(xué)趨化物（chemoattractant）彌散形成濃度差異的空間，觀(guān)察細菌群移現象、環(huán)形（ring）標志，以及空白區域等外觀(guān)形態(tài)，進(jìn)一步分析野生型和突變型細菌，以及化學(xué)引誘分子（chemoattractant）和化學(xué)排斥分子（chemorepellent）的趨向變化。

產(chǎn)品內容

  通用介質(zhì)液（Reagent A）         毫升

  選擇介質(zhì)液（Reagent B）         毫升

  重懸液（Reagent C）          毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)             1份

保存方式

保存在4℃的冰箱里；有效保證6月 

用戶(hù)自備

50毫升錐形離心管：用于混勻介質(zhì)液的容器

100mm培養皿：用于細菌趨化實(shí)驗的容器

恒溫水?。河糜谠噭?/span>保溫

微型臺式離心機：用于樣品操作

培養箱：用于細菌培養

量尺：用于測量細菌移動(dòng)距離

實(shí)驗步驟

一、 瓊脂平板準備

1． 將  通用介質(zhì)液（Reagent A）或選擇  介質(zhì)液（Reagent B）置于微波爐里加熱溶化（注意：避免溢出）

2． 放進(jìn)50℃恒溫水浴

3． 移出xx毫升  通用介質(zhì)液（Reagent A）或  選擇介質(zhì)液（Reagent B）到50毫升錐形離心管

4． 即刻加入1毫升用戶(hù)自備的待測的化學(xué)趨化分子

5． 上下傾倒混勻

6． 最快速度倒入100mm培養皿

7． 均勻鋪滿(mǎn)整個(gè)底面，避免氣泡產(chǎn)生

8． 置于室溫下至少2小時(shí)或4℃冰箱里1小時(shí)，使膠體凝固

9． 倒置培養皿，在其外底面，用尺和標記筆做好標記――根據檢測要求設置如下：

1）一板多點(diǎn)

2）一板單點(diǎn)

二、 細菌準備

1． 準備10毫升過(guò)夜生長(cháng)的新鮮的培養細菌（OD590=0.4，達5 X 10⁷細菌/毫升）

2． 移取1毫升到新的1.5毫升離心管

3． 放進(jìn)微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g

4． 小心抽掉上清液

5． 加入xx毫升  重懸液（Reagent C），混勻

6． 置于冰槽里備用

三、 趨化實(shí)驗

1． 加入10微升上述準備的待測細菌到相應的標記點(diǎn)位

2． 室溫下靜置30分鐘

3． 小心倒置放進(jìn)35℃培養箱孵育6至8小時(shí)（一板多點(diǎn)）或24至48小時(shí)（一板單點(diǎn)），保持培養箱濕潤

4． 觀(guān)察細菌群移現象：建議每隔2小時(shí)觀(guān)察1次

5． 直至出現趨化環(huán)

6． 結果分析：

1) 使用量尺進(jìn)行細菌移動(dòng)距離測量：細菌點(diǎn)和細菌趨化環(huán)之間的距離

2) 細菌趨化環(huán)密度計量：包括所有移動(dòng)細胞，或設定移動(dòng)區域的細胞

7． 構建距離、密度、時(shí)間、趨化物濃度包括空白對照的關(guān)系曲線(xiàn)

8． 確定趨化系數（chemokinesis coefficiency）：趨化物濃度和細菌移動(dòng)密度的關(guān)系曲線(xiàn)的斜率

注意事項

1． 本產(chǎn)品為10次（100mm培養皿）操作

2． 其它實(shí)際操作的培養皿大小與試劑使用量按比例調整

3． 所有培養操作和使用工具均須在嚴格無(wú)菌狀態(tài)下進(jìn)行

4． 操作時(shí)須戴手套

5． 建議使用系列趨化物濃度進(jìn)行檢測比較；注意一板只能進(jìn)行一種濃度檢測

6． 通常不同細菌分析比較，可以采用一板多點(diǎn)

7．   通用介質(zhì)液（Reagent A）常用于不同細菌（例如突變菌等）的比較分析或明確趨化分子的檢測；更適合于排斥分子的分析

8．   選擇介質(zhì)液（Reagent B）常用于單一趨化分子或未知趨化分子的分析

9． 建議待測細菌量為10⁵細菌/樣品點(diǎn) 

10． 建議細菌為新鮮培養

11． 已經(jīng)鋪板但暫時(shí)保存的含凝膠體的培養板或培養皿，用PARAFILM密封，在4℃冰箱里儲存

12． 操作時(shí)小心輕柔，避免膠體脫位

13． 通常細菌移動(dòng)為4至24小時(shí)之間；注意隨時(shí)觀(guān)察，避免細菌移動(dòng)過(guò)快，失去分析良機

14． 排斥分子檢測可以持續觀(guān)察至48小時(shí)終止

15．   通用介質(zhì)液（Reagent A）的正常細菌的趨化性參考圖像

16．   選擇介質(zhì)液（Reagent B）的正常細菌的單一趨化分子的趨化性參考圖

17． 本公司提供系列細胞趨化分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)病毒和支原體污染

3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定重復率好