MB50379.2 v.A
組織甘油激酶(Glycerol kinase)活性酶連續反應光譜法定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
主要用途
組織甘油激酶(Glycerol kinase)活性酶連續反應光譜法定量檢測試劑是一種旨在使用甘油激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續循環(huán)法反應系統中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光譜法測定樣品中酶活性的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適合于各種動(dòng)物、人體組織裂解懸液樣品的甘油激酶的性活性檢測???/span>用于脂類(lèi)代謝、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩定,反應優(yōu)化,檢測敏感。
技術(shù)背景
甘油激酶(glycerol kinase;GK;EC2.7.1.30),又稱(chēng)為ATP甘油-3-磷酸轉移酶(ATP:glycerol 3-phospho transferase),廣泛存在于生物界。甘油激酶催化由ATP提供的磷酸基團,轉移到甘油分子上的反應,產(chǎn)生磷酸甘油。哺乳動(dòng)物中,甘油激酶參與糖和脂類(lèi)代謝的交接部位的反應;微生物中,甘油激酶幫助利用甘油分子,作為微生物生長(cháng)所需的碳源。臨床上常用于定量檢測人體內甘油水平。通常脂肪細胞(adipocyte)缺乏甘油激酶,由甘油三酯降解產(chǎn)生的甘油分子,由血液轉運到肝臟后,甘油激酶參與脂類(lèi)分解(lipolysis)。基于底物甘油分子,在A(yíng)TP的參與下,受到甘油激酶的磷酸化,進(jìn)而通過(guò)丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)反應系統中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)轉化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm),來(lái)定量分析甘油激酶活性。其反應系統為:
glycerol kinase
Glycerol + ATP → ADP + α-glycerophosphate
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
(高吸收峰) (低吸收峰)
產(chǎn)品內容
清理液(Reagent A) 60毫升
裂解液(Reagent B) 10毫升
緩沖液(Reagent C) 20毫升
反應液(Reagent D) 2.5毫升
陰性液(Reagent E) 2毫升
底物液(Reagent F) 500微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融; 反應液(Reagent D),避免光照,有效保證6月
用戶(hù)自備
1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器
(微型)臺式離心機:用于樣品操作
比色皿:用于光譜分析的容器
分光光度儀:用于光譜分析
培養箱:用于孵育反應物
實(shí)驗步驟
實(shí)驗開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化; 反應液(Reagent D)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。
二、測定準備
【(樣品讀數-背景讀數)X 1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數】÷【0.1(樣品容量;毫升)X 6.22(毫摩爾吸光系數 X 10(反應時(shí)間;分鐘)】=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克
單位=微摩爾NADH/分鐘
[(樣品讀數-背景讀數)X樣品稀釋倍數X 0.25(體系容量;毫升)]÷[0.025(樣品容量;毫升)X 6.22(毫摩爾吸光系數)X 0.6(光徑距離;厘米)X 10(反應時(shí)間;分鐘)]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克
單位=微摩爾NADH/分鐘
注意事項
質(zhì)量標準
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