小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL) 水平。用純化的倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入核因子κB受體活化因子配基(RANKL) ,再與HRP標記的核因子κB受體活化因子配基(RANKL) 抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子κB受體活化因子配基(RANKL) 呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL) 濃度。
小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒樣本處理及要求:
1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如出現沉淀,應再次離心。
2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3、尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4、細胞培養上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
5、組織標本:切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6、標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
7、小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。