冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒詳細分析概述

　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是一種旨在通過(guò)長(cháng)波長(cháng)的熒光染料特異性地聚集在線(xiàn)粒體，并呈現紅色，用于分析和觀(guān)察線(xiàn)粒體活性與形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種冰凍切片組織線(xiàn)粒體的形態(tài)觀(guān)察、活性探測和定位標記。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，活體檢測，分辨率高，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定，滯留持久。
　　線(xiàn)粒體是細胞中重要的細胞器，其主要功能是提供細胞內各種物質(zhì)代謝所需要的能量。線(xiàn)粒體大量存在于代謝旺盛的細胞中，如動(dòng)物的心肌，肝，腎等器官和組織的細胞中。大量制備線(xiàn)粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養細胞中提取。在光學(xué)顯微鏡下線(xiàn)粒體呈現為顆粒狀、棒狀或彎曲細線(xiàn)。線(xiàn)粒體熒光探針，是一種含有硫醇氯甲基基團的熒光染料，自由通過(guò)細胞膜，選擇性地聚集在線(xiàn)粒體。它可以對活細胞進(jìn)行直接染色，在580nm波長(cháng)可以清晰看到被染成紅色的線(xiàn)狀或顆粒小體的線(xiàn)粒體。并可以分析線(xiàn)粒體膜電位，以檢測線(xiàn)粒體活性。
　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒染色原理：
　　1、細胞核染色的原理：
　　蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著(zhù)色。細胞核內染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
　　2、細胞漿染色的原理：
　　伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著(zhù)色。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結合，使細胞漿著(zhù)色，呈現紅色。
　　3、分化作用：
　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用，所用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結構，使組織與色素分離而退色。經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過(guò)多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。
　　4、返藍作用：
　　分化之后，冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現藍色，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍作用或藍化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時(shí)間較長(cháng)。