MB10097.1 v.A
通用型純化線(xiàn)粒體呼吸控制率(RCR)定量檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
主要用途
通用型純化線(xiàn)粒體呼吸控制率(RCR)定量檢測試劑是一種旨在通過(guò)極譜法檢測系統(polarographic system)測定新鮮活體線(xiàn)粒體在ADP存在(III態(tài)呼吸)與否(IV態(tài)呼吸)的情況下溶解氧(dissolved oxygen)的消耗差異,即呼吸控制率(RCR),以評價(jià)線(xiàn)粒體結構和功能完整性以及氧化磷酸化效率的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。可以被用于線(xiàn)粒體生理功能和藥物作用機制等的研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)易,活體檢測,性能穩定。
技術(shù)背景
線(xiàn)粒體是細胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心。電子傳遞和ATP合成通過(guò)質(zhì)子梯度偶聯(lián)成一體。線(xiàn)粒體結構完整,功能正常,底物充分,電子傳遞形成的質(zhì)子梯度不斷被消耗,電子得以順暢傳遞,氧氣快速消耗,其耗氧率大,為III態(tài)呼吸。ADP耗竭,質(zhì)子梯度不能消耗,阻礙電子傳遞,氧氣消耗減少,為IV態(tài)呼吸。 呼吸控制率(respiratory control ratio或respiratory control index;RCR),又稱(chēng)呼吸調節比,是指III態(tài)(加入ADP)的呼吸速率與IV態(tài)(ADP耗竭)的呼吸速率之比。正常線(xiàn)粒體的RCR為3至10:RCR降低意味著(zhù)線(xiàn)粒體ATP合成功能損傷,呼吸障礙;RCR增高意味著(zhù)細胞活動(dòng)旺盛,代謝加快。
產(chǎn)品內容
介質(zhì)液(Reagent A) 毫升
IV態(tài)底物液(Reagent B) 微升
III態(tài)底物液(Reagent C) 微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,有效保證6月
用戶(hù)自備
CLARK氧電極儀:用于測定溶解氧濃度
實(shí)驗步驟
實(shí)驗開(kāi)始前,制備好新鮮的線(xiàn)粒體置于冰槽里備用;同時(shí)將-20℃冰箱里的試劑融化,并預熱氧電極儀到25℃。然后進(jìn)行下列操作。
1. 加入xx毫升 介質(zhì)液(Reagent A)到反應玻璃槽
2. 使用微型磁力子攪拌,充分混勻
3. 密封反應槽
4. 開(kāi)始記錄氧濃度:起始飽和氧濃度值為0.240微摩爾分子氧/毫升(25℃)
5. 持續記錄1分鐘后,注射加入20微升待測的線(xiàn)粒體(總量2毫克)(注意:氧濃度可能瞬時(shí)變化)
6. 持續記錄1分鐘后,注射加入xx微升 IV態(tài)底物液(Reagent B)――開(kāi)始IV態(tài)呼吸(注意:參見(jiàn)注意事項9)
7. 持續記錄2分鐘:出現氧濃度緩慢下降
8. 繼續注射加入xx微升 III態(tài)底物液(Reagent C)(注意:氧濃度在10秒鐘內開(kāi)始下滑)――開(kāi)始III態(tài)呼吸(注意:參見(jiàn)注意事項9)
9. 持續記錄直至出現線(xiàn)性下行斜線(xiàn)出現拐點(diǎn)
10. 分別測算III態(tài)呼吸速率和IV態(tài)呼吸速率:氧濃度降低值÷實(shí)際時(shí)間(分鐘)
11. 計算呼吸控制率:III態(tài)呼吸速率÷IV態(tài)呼吸速率
注意事項
1. 本產(chǎn)品為20次操作
2. 操作時(shí),須戴手套
3. 確保反應玻璃槽潔凈,密閉,以免氧氣流入
4. 線(xiàn)粒體樣品須新鮮制備,建議不要凍存;制備的線(xiàn)粒體膜須完整,非常重要;建議使用 線(xiàn)粒體分離試劑盒-GMS10006.1
5. 注射加入反應槽時(shí),避免氣泡和空氣注入
6. 避免乙醇污染;乙醇增加氧濃度;如果底物或抑制劑須使用乙醇溶解,則加注10微升
7. 保持反應槽溫度恒定,溫度降低,氧濃度升高
8. 反應液充分混勻,和環(huán)境氧保持平衡
9. 加注 IV態(tài)底物液(Reagent B)和 III態(tài)底物液(Reagent C)前,須充分凍融和混勻
10. 嚴格按照規定加注試劑,切莫增加加注試劑容量
11. 本公司提供系列線(xiàn)粒體檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
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